丝兰提取物在水产上的应用，山兰的化学成分及其抗菌抗氧化等生物活性研究
前言
山兰 Oreorchas patens (Lindl.) Lindl.[1]为兰科山兰属药用植物，主要分布于我国东北地区，在西北、西南等地区亦有分布。药用部位为假鳞茎[2]，具有化痰止咳、滋阴清肺、解毒行瘀等功效，临床上常用于治疗痈疽疮肿、无名肿毒等病症[3]。根据《中药大辞典》记载，中药材山慈菇的原植物有兰科杜鹃兰、独蒜兰、山兰三种植物[4]。
而据《中华本草》记载，冰球子，即山兰属植物山兰 O. patens (Lindl.) Lindl.的假鳞茎，别名为山慈菇[5]，进一步证实了山兰的药用价值，但《中华人民共和国药典》（2015版）中山慈菇来源项下，并未收载山兰 O. patens (Lindl.) Lindl.这一植物。
中药山慈菇的相关研究就目前来说已经比较透彻深入，学者们对其化学成分的研究也较多。王超[37] 等人在独蒜兰中分离得到 35 个菲类、二氢菲类和联苄类化合物，韩少伟[38] 等人在独蒜兰中分离得到了 11 个丁二酸苄酯苷类化合物，王晓娟[39] 等人在云南独蒜兰中分离出 30 个化合物，其中除两个三萜类化合物外，其余均属于菲类、二氢菲类和联苄类化合物。随着对山慈菇三种原植物化学成分研究的不断深入，目前山慈菇中所具有的成分已经分离出了绝大一部分。
根据对相关文献报道的整理可知，现对山兰中化学成分的分离鉴定主要集中在对其乙酸乙酯萃取部位的化学成分分析。目前，从山兰中共分离鉴定出 21 个化合物，主要有酯类化合物、酚酸类化合物、蒽类衍生物、苷类化合物、菲类化合物及烷烃类化合物。
1、酯类
目前从山兰中分离鉴定出 7 个酯类化合物[22,40] ，包括邻苯二甲酸二（2-乙基己）酯（1）、邻苯二甲酸丁酯异丁酯（2）、邻苯二甲酰正二丁酯（3）、邻苯二甲酸二戊酯（4）、对苯二甲酸二丁酯（5）、β-谷甾醇亚油酸酯（6）和二十一碳-13-烯酸甲酯（7）。化合物结构简式见图 1。
2、酚酸类
酚类化合物普遍存在于植物体内，是最丰富的次生代谢产物[41] 。具有抗氧化、抗肿瘤、抗增殖、降血压、抑菌、保护心血管和肝脏、预防糖尿病等作用，在食品、生物、医药及环保等领域应用广泛[42] 。目前从山兰中共分离出 4 个酚酸类化合物，包括羟基*********类的对羟基*********（8）[22] 、原儿茶酸（9）、对苯二酚（10）[23]以及木脂素类的化合物丁香脂素（11）[22] 。化合物结构简式见图 2。
3、蒽类衍生物
目前从山兰中分离鉴定出 2 个蒽类衍生物，包括蒽醌类以及蒽酚类化合物。其中，蒽酚类化合物为卷瓣兰蒽（12）（cirrhopetalanthin）[22,40] ，该化合物曾为山慈菇的原植物之一杜鹃兰中特有的成分，原文珂等人[43] 从杜鹃兰的乙酸乙酯部位中分离鉴定出 cirrhopetalanthin；夏文斌等人[44] 研究发现，
化合物卷瓣兰蒽 cirrhopetalanthin 对肺癌、卵巢癌、胃癌、结肠癌、肝癌和乳腺癌细胞有中等强度的细胞毒活性，IC50 在 8.37~13.22 μmol·L-1 。蒽醌类化合物为游离型蒽醌类的大黄素（13）[22] 。大黄素是中药大黄中所含有的主要化学成分之一，具有泻下的效应[45] ，且其可抑制人肝癌细胞系的生长和增殖[46] ，并有助于提高其他抗肿瘤类药物的疗效。化合物结构简式见图 3。
4、菲类
根据国内外对菲类化合物生物活性的众多报道可知，其可以抗血小板聚集，而且有良好的抗肿瘤效果。目前，共从山兰中分离鉴定出 1 个菲类化合物，为 7-羟基-2,4-二******氧-1-（对羟基苄基）菲（14）[23] 。化合物结构简式见图 4。
相关研究[37,39,47] 分别对杜鹃兰、独蒜兰和云南独蒜兰进行化学成分的分离实验，且分离鉴定出来的化合物均是主要以菲类、二氢菲类以及联苄类成分居多，这一类成分被认为是山慈菇起抗肿瘤作用的主要药效成分；并且他们通过体外活性实验研究，均发现了山慈菇中菲类化合物具有良好的抗肿瘤活性。Tu 等[48] 在杜鹃兰乙酸乙酯部位分离得到 4 个菲类化合物，这 4 个菲对丁酰胆碱酯酶和 β-淀粉样蛋白的聚集有一定的抑制效果，同时还具有较为显著的抗氧化活性，有望被开发为治疗阿尔兹海默症的药物。
山兰的药效与山慈菇相近，对山兰中菲类化合物的分离鉴定可以成为继续探究山
兰中化学成分的重点目标，让研究更系统、更全面，以求更迅速地明确山兰的药效物
质基础。
5、烷烃
目前从山兰中分离鉴定出 2 个烷烃类化合物[22,40] ，分别为二十五烷（15）和三十
六烷（16）。
6、醛类
目前从山兰中分离鉴定出 1 个醛类化合物，为 5-羟******糠醛（17）[22] 。化合物结
构简式见图 5。
7、其他
植物中存在许多常见的次生代谢产物，目前从山兰中分离鉴定出的 β-谷甾醇（18）[22-23,40] 、Triphyllo（19）[23]等甾醇类化合物、β-胡萝卜苷（20）[22-23,40] 、腺苷（21）[22] 等苷类化合物，这些均属于植物中较常见的代谢产物。
通过与山慈菇中已鉴定出的化学成分进行对照，共 9 个化合物是山兰与山慈菇共有的成分[47,37,39] ，分别为 β-谷甾醇、腺苷、大黄素、5-羟******糠醛、原茶儿酸、丁香脂素、三十六烷、卷瓣兰蒽以及 β-胡萝卜苷，其中卷瓣兰蒽、三十六烷、邻苯二甲酸二（2-乙基己）酯和原茶儿酸是山兰与杜鹃兰的共有成分。
1、抑菌活性
多环节调节免疫、改善耐药性、安全性高是中药抗菌药所具有的优势，因此中药抗菌药的研究与开发也越来越得到人们的重视。据报道，已经发现中药山慈菇具有很强的抑菌活性。田新新等[39] 学者将山兰、独蒜兰、云南独蒜兰、杜鹃兰提取物经 D-101大孔树脂进行分离，得到了 16 个组分，采用液体小培养法进行了相关的抑菌活性实验。
其抑菌实验结果显示，这些组分对大肠埃希氏菌都没有抑制作用，其中 12 个醇提取物对铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌两种菌具有较强的抑制活性。该研究结果表明，山兰、独蒜兰、杜鹃兰等 4 种中药材具有相近的抑菌活性。
2、抗氧化活性
甘甜等学者[22,52] 对山兰的******、正丁醇、甲醇这 3 种提取物进行抗氧化活性测定，并与抗氧化剂 Vc 进行了比较，采用总抗氧化能力、ABTS 自由基清除等 4 种测试方法分析了这些提取物的抗氧化能力。结果表明，山兰的******、正丁醇、甲醇提取物都具有抗氧化能力，但总抗氧化能力不强；对 ABTS 自由基和 DPPH 都具有清除能力，而且正丁醇、甲醇提取物的清除能力较******提取物的清除能力好，但对 DPPH 自由基的清除能力明显低于 Vc。
上述研究充分证实，山兰的******、正丁醇、甲醇这 3 种提取物都有较强的抗氧化活性，其中抗氧化活性最好的是正丁醇提取物。在 0.4 mg/mL的质量浓度下，正丁醇提取物对 ABTS 自由基的清除率与 Vc 相近，这表明了其极强的抗氧化能力，这也为对山兰中含有化合物的进一步药理活性实验提供参考。
3、免疫活性
植物多糖对机体的免疫具有增强效果，很多种中药材的多糖对机体的免疫同样起到很重要的调节作用。魏伟等人[23,53] 采用腹腔注射环磷酰胺的方法得到免疫低下的小鼠，对小鼠进行灌胃使药物发挥调节的功效，设置空白对照组、阳性对照组、模型对照组、山兰多糖高、中、低剂量组，对小鼠的脏器指数、血清溶血素生成水平、吞噬指数以及迟发型变态反应等进行了测定。
结果表明，山兰多糖高剂量对于免疫低下小鼠的脏器指数具有显著的影响；对血清溶血素生成水平、吞噬指数有显著的提高作用，对减轻小鼠的耳肿胀也有明显的效果。此外，山兰多糖在 IL-2（白细胞介素-2）因子水平对免疫缺陷具有显著恢复提高效果，对小鼠的 IFN-γ（干扰素-γ）水平也具有显著促进作用。该研究结果表明，山兰多糖高剂量具有提高免疫的能力。
山兰在东北地区的民间一直作为药用，且其功效与山慈菇极为相似。东北地区位于我国的最北部，气候较寒冷，古代的医家学者对于东北药用资源的开发利用亦存在盲区[54] ，因此加快山兰药用资源的开发利用[20] ，具有很好的应用前景。
综上所述，无论是将山兰作为山慈菇药材的新基源，还是将其开发成为一种新的药用资源，对山兰的化学成分与药理作用进行深入研究都具有重大的意义与实际的价值。今后应对其进行更加全面、更加系统的研究，继续对山兰所含有的次生代谢物质进行研究实验，可以有目的性地先分离一类化合物，再逐步发现并鉴定出更多的山兰中所含有的化学成分，最终实现阐明该药用植物的药效物质基础的目的。
与此同时，也应继续深入开展山兰及其中化学成分的药理活性研究实验，为明确其药物治疗机制提供理论基础与依据，再从基因水平、蛋白水平以及整体水平明确其作用机制，为进一步的开发该民间中草药提供理论支持。
